大腸桿菌感受態(tài)細胞表達分析
簡要描述：
大腸桿菌感受態(tài)細胞表達分析BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質(zhì)粒pLysS，具有氯mei素抗性。pLysS含有表達T7溶jun酶的基因，T7溶jun 酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達。
產(chǎn)品時間：2024-12-16
打印當前頁BL21 (DE3) pLysS Competent Cell
大腸桿菌感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Kanamycin（kan）卡那mei素；Carbenicillin 羧芐青mei素；In-fusion 一步法克隆檢測試劑盒；
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2332-1000UL | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2332-5000UL | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2332-1000UL | MF2332-5000UL | ||
MF2332-A | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2332-B | Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質(zhì)粒pLysS，具有氯mei素抗性。pLysS含有表達T7溶jun酶的基因，T7溶jun 酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶）。
BL21 (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1）感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2）最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3）進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進行。
4）為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。
5）產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供對照實驗用。
6）BL21(DE3)pLysS菌株攜帶質(zhì)粒pLysS，除復(fù)蘇培養(yǎng)基不含抗生素外，其余所用培養(yǎng)基/培養(yǎng)液均應(yīng)含34μg/ml氯mei素，以防止質(zhì)粒丟失。
7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1）取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預(yù)冷的離心管內(nèi)，置于冰浴中。【注意：一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。】以下實驗以50 μl感受態(tài)細胞為例。
2）向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴靜置30min。
3）42℃熱擊45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
4）向每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復(fù)蘇。
5）根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收， 倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
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MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade 氯mei素 | 10g |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade 利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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