Hoechst 33342/PI Double Stain Kit細胞凋亡雙染試劑盒

產品標簽

Hoechst 33342/PI凋亡檢測試劑盒，JC-1膜電位檢測；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒；TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒；

產品信息

產品描述

Hoechst 33342/PI細胞凋亡雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）是一種采用Hoechst 33342和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染進行細胞凋亡與壞死分析的檢測試劑盒。檢測原理在于：Hoechst 33342是一種活細胞核染料，能穿透正常細胞以及凋亡細胞膜，與DNA結合（很大激發波長為350nm，發射波長為461nm），呈現藍色熒光。當細胞發生凋亡，染色質發生固縮，染色后的細胞熒光比正常細胞明顯增強。而PI是一種死細胞核染料，不能穿透細胞膜，對于具完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。但對于壞死細胞，由于膜的完整性喪失，PI能夠穿透進入細胞，與DNA結合（很大激發波長為536nm，發射波長為617nm），呈現紅色熒光。經Hoechst 33342/PI雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測，正常細胞為弱紅色熒光+弱藍色熒光；凋亡細胞為弱紅色熒光+強藍色熒光；壞死細胞為強紅色熒光+弱藍色熒光。

本試劑盒可檢測100個樣品，每個樣本的細胞數量可為0.1~1×0⁶。

產品包裝

注意事項

• 熒光染料均存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。

• Hoechst 33342孵育細胞時間不宜過長，一般控制在20min內。太長容易引起探針的發射光譜由藍光向紅光遷移，導致紅色熒光與藍色熒光的比例改變。

• PI對人體有一定的刺激性，請注意適當防護。

• 如果要進行組織的凋亡和壞死檢測，請將組織消化制備成單細胞懸液后再檢測。

• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

注意事項

1）本品不是臨床藥物，只能用于科研用途，不能用于診斷或臨床用途。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、細胞樣本制備

1.1 貼壁細胞

1.1.1 小心收集細胞培養液到一個無菌離心管內備用；

1.1.2 用yi蛋白酶消化細胞至細胞可以輕輕用移液槍或槍頭吹打下來，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有貼壁細胞，并輕輕吹散細胞

1.1.3 收集上述細胞懸液到離心管內，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，小心吸取上清并丟棄，可留約50μl培養液，以免吸走細胞。【注意】：某些特殊細胞，如果沉淀不充分，可以適當提高離心力或者延長離心時間。

1.1.4 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5ml無菌離心管，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底。

1.1.5 小心吸取上清并丟棄，可留約50μl PBS，以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

1.2 懸浮細胞

1.2.1 4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，小心吸取上清并丟棄，可留約50μl培養液，以免吸走細胞。

1.2.2 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5ml無菌離心管，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底。

1.2.3 小心吸取上清并丟棄，可留約50μl PBS，以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

二、染色前制備

2.1細胞染色緩沖液（1×）的準備：取適量細胞染色緩沖液（2×）與無菌去離子水或蒸餾水等比例混合，即為細胞染色緩沖液（1×），4℃保存備用。

2.2 細胞重懸：將上述收集好的0.1~1×0⁶細胞，加入0.9ml 細胞染色緩沖液（1×），重懸細胞沉淀。

三、Hoechst 33342/PI雙染

3.1 加入5μl Hoechst 33342染色液，置于37℃水浴，孵育5~15min。

3.2 置于冰水冷卻，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，棄上層染色液。

3.3 加入0.9ml 細胞染色緩沖液（1×），重懸細胞沉淀。

3.4 加入5μl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。

【注意】：也可一步法進行染色：加入5μl Hoechst 33342染色液和5μl PI染色液，輕輕混勻，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。

四、結果分析

4.1 流式細胞儀檢測

用流式細胞儀在激發波長400~500nm處檢測藍色熒光，在＞630nm處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

4.2 熒光顯微鏡檢測

檢測前，4℃，1000g離心3～5min沉淀細胞，用PBS洗滌一次，再涂片觀察紅色和藍色熒光。

【注意】：對于貼壁細胞，也可不收集細胞，棄培養液后直接依次按照上述比例加入細胞染色緩沖液（1×）、Hoechst 33342染色液、PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20～30min。染色后，PBS洗滌一次，再在熒光顯微鏡下觀察。

4.3 結果呈現

正常細胞呈低藍光/低紅光，凋亡細胞呈高藍光/低紅光；壞死細胞呈低藍光/高紅光。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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細胞凋亡雙染試劑盒

細胞凋亡雙染試劑盒