CCK-8 細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)的步驟詳細(xì)說(shuō)明
1. 向各孔中加入100 μl細(xì)胞懸液。a)
2. 在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)
3. 向各孔中加入各濃度的待測(cè)溶液c)10 μl。
4. 37℃下孵育。
5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。
6. 37℃下孵育1-4小時(shí)。e)
7. 測(cè)定450 nm處的OD值。
a) 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。
b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱guo夜預(yù)培養(yǎng)。
c) 使用培養(yǎng)基或PBS來(lái)制備溶液。
d) 如果待測(cè)溶液有還原性，測(cè)定不含細(xì)胞，但含有CCK-8的待測(cè)溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進(jìn)行檢測(cè)。
e) 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。